RT - Journal Article T1 - A comparison of recombinant proteins production in CHO and MCF 7 cell lines JF - Yafteh YR - 2014 JO - Yafteh VO - 16 IS - 2 UR - http://yafte.lums.ac.ir/article-1-1674-fa.html SP - 99 EP - 106 K1 - Transfection K1 - MCF7 K1 - CHO K1 - RT-PCR K1 - Western blotting AB - مقدمه: هدف ازمطالعه‌ی حاضر، مشخص نمودن رده سلولی مناسب‌تر، جهت مطالعات تولید پروتئین در سیستم‌های یوکاریوتی می‌باشد. پس از ترانسفکشن، تغییرات ایجاد شده در سطوح بیانیRNA و پروتئین نوترکیب هدف ارزیابی شد. مواد و روش‌ها: به منظور بررسی بیان ژن مورد نظر و تولید پروتئین نوترکیب E6 پاپیلوما ویروس انسانی تیپ 16 در سلول‌‌های مورد آزمایش، از پلاسمید نوترکیب pcDNA3-E6 و نیز دو رده سلولی متفاوت MCF7 و CHO استفاده گردید. به این منظور به دنبال ترانفکشن، بیانRNA و پروتئین هدف بوسیله واکنش زنجیره‌ای پلیمراز معکوس (RT-PCR) و آزمایش لکه‌گذاری وسترن با استفاده از ژل SDS-PAGE و مونوکلونال آنتی بادی Anti-E6 ارزیابی گردید. یافته‌ها: در این مطالعه به دلیل غلظت بسیار پایین پروتئین تولیدی در سلول‌های MCF7 ، آزمایش RT-PCR مثبت و آزمایش وسترن بلاتینگ آن منفی شد، این در حالی است که در رده سلولی CHO هر دو آزمایش ذکر شده مثبت شدند بحث و نتیجه‌گیری: با توجه به نتایج بدست آمده توصیه می‌شود از سلول CHO به منظور ترانسفکشن و تولید پروتئین نوترکیب در سیستم‌هایی که تولید بالای پروتئین امکان پذیر نیست استفاده گردد LA eng UL http://yafte.lums.ac.ir/article-1-1674-fa.html M3 ER -