scientific magazine yafte
مجله علمی پژوهشی یافته
yafte
Medical Sciences
http://yafte.lums.ac.ir
72
journal72
1563-0773
2981-0779
10.18869/acadpub.yafte
en
jalali
1392
10
1
gregorian
2014
1
1
15
4
online
1
fulltext
fa
شناسایی گونههای آسپرژیلوسی با کاربرد تک آنزیم محدودساز MwoI در روش RFLP مبتنی بر آمپلیفیکاسیون ناحیه ژنی rDNA
Identification of Aspergillus species using a single restriction enzyme MwoI in RFLP method based on the amplification of rDNA gene.
پژوهشي
Research
مقدمه: گونههای آسپرژیلوس بعضاً با بیماریهای انسان مرتبط هستند. یافتن یک روش دقیق و سریع برای شناسایی این قارچها اهمیت ویژه-ای دارد و میتواند در غربالگری بیماری و اهداف اپیدمیولوژیک مؤثر باشد. بحث و نتیجهگیری: روش PCR-RFLP مبتنی بر ژن DNA ریبوزومی، برای تعیین گونههای آسپرژیلوسی مورد استفاده قرار گرفت. کاربرد آنزیم محدودساز MwoIما را قادر نمود که بیشترین افتراق را در بین گونههای آسپرژیلوسی ایجاد نماییم و گونههای مهم آسپرژیلوسی را در مدت زمان کوتاهی شناسایی کنیم. یافتهها: ما موفق به شناسایی هشت گونه مهم آسپرژیلوس شامل: آسپرژیلوس فلاووس، آسپرژیلوس نایجر، آسپرژیلوس فومیگاتوس، آسپرژیلوس ترئوس، آسپرژیلوس کلاواتوس، آسپرژیلوس اکراسئوس، آسپرژیلوس آمستلوئیدامی و آسپرژیلوس نیدولانس با کاربرد روش مولکولی آزمون شدیم. شناسایی و افتراق مهمترین گونههای آسپرژیلوس بدست آمده از کشت کوتاه مدت 36 ساعته و استفاده از پروفایل معرفی شده شامل استخراج DNA، PCR و هضم آنزیمی برای تقریباً تمام نمونههای آزمون شده زمانی در حدود یک روز کاری نیاز داشت. مواد و روشها: نمونههای ما شامل گونههای مختلف آسپرژیلوسی از نمونههای بالینی و محیطی چهار بیمارستان آموزشی بودند. آسپرژیلوسها ابتدا با روش مورفولوژیک شناسایی شدند. تودههای میسلیومی آسپرژیلوسی از کشتهای سابورود براث استخراج شده برای استخراجDNA به روش فنل کلروفرم- گلاسبید مورد استفاده قرار گرفتند. آمپلیفیکاسیون ژن rDNA با استفاده از پرایمرهای یونیورسال ناحیه ITS انجام شد و محصولات واکنش زنجیرهای قابل هضم با آنزیم محدودساز MwoI با استفاده از روش PCR- RFLP مورد تفکیک قرار گرفتند.
Background: Aspergillus species are occasionally associated with human infections. It is essential to find a rapid and reliable method to identify these fungi and can be useful for screening the disease and also epidemiological aims. Materials and Methods: Our subjects included Aspergillus species isolated from clinical and environmental sources of four Iranian educational hospitals. Aspergilli were primarily identified using morphological methods in the level of species. Aspergillus mycelia were harvested from sabouraud broth media and the used for the DNA extraction by Glass beads-Phenol Chloroform method. Ribosomal DNA gene was amplified using the universal primers of ITS. The resulted PCR products were subjected to a digestion with a novel restriction enzyme, MwoI in RFLP method. Results: We could identify eight important species of Aspergillus including: A. flavus, A. fumigatus, A. niger, A. terreus, A. clavatus, A. nidulans, A. ochraceus, A. amsteloidami using tested molecular method. The identification of Aspergillus species was carried out using a protocol including, extraction, PCR and RFLP in a short time 36 hour culture . Conclusion: The method of the PCR-RFLP based on ribosomal DNA gene with the novel restriction enzyme, MwoI enabled us to identify the most medically important Aspergillus species in a short time.
آسپرژیلوس، آمپلیفیکاسیون، آنزیم محدودساز.
Aspergillus, Amplification, Restriction enzyme.
80
88
http://yafte.lums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-451&slc_lang=fa&sid=1
kambiz
Diba
کامبیز
دیبا
kambiz37diba@gmail.com
720031947532846008158
720031947532846008158
Yes
seyed hosein
Mirhendi
سیدحسین
میرهندی
720031947532846008159
720031947532846008159
No
parivash
Kordbacheh
پریوش
کردبچه
720031947532846008160
720031947532846008160
No
zohre
Khorshidvand
زهره
خورشیدوند
720031947532846008161
720031947532846008161
No