scientific magazine yafte
مجله علمی پژوهشی یافته
yafte
Medical Sciences
http://yafte.lums.ac.ir
72
journal72
1563-0773
2981-0779
10.18869/acadpub.yafte
en
jalali
1393
6
1
gregorian
2014
9
1
16
2
online
1
fulltext
fa
مقایسه میزان تولید پروتئین نوترکیب در دو رده سلولی CHO و MCF7
A comparison of recombinant proteins production in CHO and MCF 7 cell lines
پژوهشي
Research
<div align="right" style="direction: rtl">
مقدمه: هدف ازمطالعهی حاضر، مشخص نمودن رده سلولی مناسبتر، جهت مطالعات تولید پروتئین در سیستمهای یوکاریوتی میباشد. پس از ترانسفکشن، تغییرات ایجاد شده در سطوح بیانیRNA و پروتئین نوترکیب هدف ارزیابی شد.
مواد و روشها: به منظور بررسی بیان ژن مورد نظر و تولید پروتئین نوترکیب E6 پاپیلوما ویروس انسانی تیپ 16 در سلولهای مورد آزمایش، از پلاسمید نوترکیب pcDNA3-E6 و نیز دو رده سلولی متفاوت MCF7 و CHO استفاده گردید. به این منظور به دنبال ترانفکشن، بیانRNA و پروتئین هدف بوسیله واکنش زنجیرهای پلیمراز معکوس (RT-PCR) و آزمایش لکهگذاری وسترن با استفاده از ژل SDS-PAGE و مونوکلونال آنتی بادی Anti-E6 ارزیابی گردید.
یافتهها: در این مطالعه به دلیل غلظت بسیار پایین پروتئین تولیدی در سلولهای MCF7 ، آزمایش RT-PCR مثبت و آزمایش وسترن بلاتینگ آن منفی شد، این در حالی است که در رده سلولی CHO هر دو آزمایش ذکر شده مثبت شدند
بحث و نتیجهگیری: با توجه به نتایج بدست آمده توصیه میشود از سلول CHO به منظور ترانسفکشن و تولید پروتئین نوترکیب در سیستمهایی که تولید بالای پروتئین امکان پذیر نیست استفاده گردد
</div>
Background : The aim of the present study was to identify a suitable cell line for studies of recombinant protein production in eukaryotic system. After transfection, altered expression levels of RNA and its target protein were analyzed.
Materials and Methods: To investigate the in vitro expression of E6 protein of human papillomavirus type 16 in cell culture, the plasmid pcDNA3-E6, and two different cell lines MCF7 and CHO were used. Following transfection, RNA expression was determined by RT- PCR and its protein target was evaluated by Western blot using SDS-PAGE gel and Anti-E6 monoclonal antibody.
Results: In this study due to the low concentration of proteins in MCF7cells, RT-PCR was positive and Western blotting was negative, while RT-PCR and Western blotting were positive for CHO cell lines.
Conclusion: Regarding the results, the use of CHO expression system as a tool for efficient transfection of recombinant protein production is suggested.
ترانسفکشن, MCF7, CHO, RT-PCR, وسترن بلاتینگ.
Transfection, MCF7, CHO, RT-PCR, Western blotting
99
106
http://yafte.lums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1280-12&slc_lang=fa&sid=1
hesam
Mirshahabi
حسام
میرشهابی
720031947532846009822
720031947532846009822
No
Department of Virology, Faculty of Medical Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran
گروه ویروس شناسی، دانشکده علوم پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران.
hooreah
Soleimanjahi
حوریه
سلیمان جاهی
soleim_h@modares.ac.ir
720031947532846009823
720031947532846009823
Yes
Department of Virology, Faculty of Medical Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran, soleim_h@modares.ac.ir
گروه ویروس شناسی، دانشکده علوم پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران.
zahra
Meshkat
زهرا
مشکات
720031947532846009824
720031947532846009824
No
Department of Virology, Faculty of Medical Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran, soleim_h@modares.ac.ir
گروه ویروس شناسی، دانشکده علوم پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران.
elham
Ahmadi
الهام
احمدی
720031947532846009825
720031947532846009825
No
Department of Virology, Faculty of Medical Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran
گروه ویروس شناسی، دانشکده علوم پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران.