دوره 22، شماره 4 - ( 11-1399 )                   جلد 22 شماره 4 صفحات 169-162 | برگشت به فهرست نسخه ها

XML English Abstract Print


Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:

Hatami bardar A, Azimi nejad M, Jafarinia M, Goodarzi H R, Mojarrad M. Generation of IDUA knockout cell lines by CRISPR/Cas mediated genome editing. yafte. 2021; 22 (4) :162-169
URL: http://yafte.lums.ac.ir/article-1-3103-fa.html
حاتمی بردر علی، عظیمی نژاد محسن، جعفری نیا مجتبی، گودرزی حمید رضا، مجرد مجید. تولید رده سلولی ناک اوت IDUA توسط تکنیک ویرایش ژنی CRISPR/Cas. مجله علمی پژوهشی یافته. 1399; 22 (4) :169-162

URL: http://yafte.lums.ac.ir/article-1-3103-fa.html


گروه ژنتیک پزشکی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی مشهد، مشهد، ایران
چکیده:   (1070 مشاهده)
مقدمه: موکوپلی ساکاریدوز تیپ (MPSI) I  بیماری شایع ذخیره ای لیزوزومی است که به واسطه کمبود آنزیم آلفا-ال – ایدورونیداز  (IDUA) بر روی کروموزوم 4 (4p16.3) ایجاد می گردد. این آنزیم در تجزیه گلیکوزآمینوگلیکانها یا موکوپلی ساکاریدهای درماتان سولفات و هپاران سولفات دخالت دارد و نقص در آنزیم مذکور منجر به افزایش سطح گلیکوز آمینو گلیکان ها (GAG) در خون و تجمع آن در اعضای مختلف بدن می شود. این ترکیبات پروتئوگلیکانی زیربنای ساختاری ماتریکس خارج سلولی و ساختار غضروفی نقاطی مثل مفاصل، دریچه­های قلبی را فراهم می­نماید؛ بعلاوه در تنظیم ارتباطات سلولی نقش دارد. در این مطالعه ما سیستم CRISPR/Cas را طراحی کردیم که ژن کد کننده انزیم IDUA را مورد هدف قرار داده  است و ما توانستیم سلوهای ناک اوت این ژن را تولید کنیم.
مواد و روش ­ها: ابتدا sgRNA هدف IUDA در پلاسمید px335 کلون شد، با استفاده از نقشه برداری محدودکننده، پلاسمید نوترکیب تأیید شد. سپس پلاسمید نوترکیب به رده سلولی اپیتلیال انسانی، HEK-293 ترانسفکت شد. کلون های جهش یافته توسط آنالیز melting غربالگری شدند و جهش آنها با تعیین توالی سنگر مشخص شد.
یافته­ ها: هضم آنزیمی و تعیین توالی سنگر، القای جهش ایندل را در دو کلون هتروزیگوت و یک کلون هموزیگوت تایید کرد.
بحث و نتیجه­ گیری:  در این مطالعه، ما با استفاده از سیستم CRISPR-Cas9 یک مدل سلولی سندرم هورلر تولید کردیم که این مدل می تواند جهت استفاده در رویکرد های درمانی این بیماری استفاده شود.
واژه‌های کلیدی: سندرم هرلر، CRISPR-Cas، ژن ناک اوت، IDUA
متن کامل [PDF 413 kb]   (342 دریافت)    
نوع مطالعه: پژوهشي | موضوع مقاله: ژنتیک
دریافت: 1399/8/5 | پذیرش: 1399/9/13 | انتشار: 1399/12/5

ارسال نظر درباره این مقاله : نام کاربری یا پست الکترونیک شما:
CAPTCHA

ارسال پیام به نویسنده مسئول


بازنشر اطلاعات
Creative Commons License این مقاله تحت شرایط Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License قابل بازنشر است.

کلیه حقوق این وب سایت متعلق به یافته می باشد.

طراحی و برنامه نویسی : یکتاوب افزار شرق

© 2022 CC BY-NC 4.0 | Yafteh

Designed & Developed by : Yektaweb