en مقایسه روش های تغلیظ و خالص سازی کیست ژیاردیا پژوهشي اصیل Original Research مقدمه: ژیاردیا لامبلیا از شایع ترین تک یاخته های روده ای انسان در سراسر جهان می باشد. تشخیص آن عمدتاً از طریق مشاهده مستقیم صورت می گیرد ولی روش های مبتنی بر IFA و ELISA نیز کاربردهای تحقیقاتی و سرواپیدمیولوژی دارد. برای تهیه آنتی بادی های پلی کلونال به هدف طراحی کیت های ELISA و IFA، مطالعات مولکولی و ژنومی، آزمایشاتی نظیر PCR و کشت انگل و سایر تحقیقات اپیدمیولوژی،نیاز به خالص سازی کیست های انگلی می باشد. روش های مختلفی برای این منظور منتشر شده است و در این بین روشی که بتواند کیست ها را در طی روند خالص سازی بطور سالم و زنده نگه داشته و نیز تقریباً عاری از سایر آلودگی های مدفوعی و مواد اضافه باشد، نیاز می باشد. لذا در این مطالعه ما بر آن شدیم که نمونه های مثبت را با چندین روش متداول خالص سازی کرده و از نظر درجه خلوص با همدیگر مقایسه کنیم. مواد و روش ها: نمونه های مثبت طی سه روش جداگانه گرادیان یک مرحله ای سوکروز، گرادیان سوکروز-پرکول و گرادیان دو مرحله ای سوکروز در دو مرحله، مورد خالص سازی قرار گرفت. در نهایت نتایج حاصل از هر سه روش فوق از نظر درجه خلوص کیستی و میزان حذف مواد اضافی مدفوع و نیز میزان کیست های باز یافتی با لام مستقیم ولام نئوبار مورد بررسی قرار گرفت. یافته ها: محلول کیستی حاصل از روش اول و همچنین دوم حاوی کمی مواد دبری و سلولزی بود، در صورتی که در روش سوم، باکتری ها تقریبا حذف شده و کیست ها سالم بدست آمدند ولی میزان باز یافت آن کمتر بود(از 2گرم مدفوع حدود 104 ×3). نتیجه گیری: روش سوم (گرادیان دو مرحله ای سوکروز) در خالص سازی و ایزولاسیون کیست های انگل نسبت به دو روش قبلی مناسب تر بوده و میزان مواد اضافی مدفوع کاهش پیدا می کند ولی با اینحال ابداع روشی ساده که بتواند مواد اضافی و زاید را تا حد زیادی حذف نموده و از طرفی میزان بازیافتی کیست ها را بالا ببرد، ضروری به نظر می رسد. Background: Giardia lamblia is the most frequent human intestinal protozoan worldwide. Diagnosis of G. lamblia by microscopic examination of stool is common, but ELISA & IFA methods have been used in research and epidemiological studies recently. To produce polyclonal antibodies for designing ELISA & IFA kites molecular and genomic studies (PCR and parasitic culture) as well as other epidemiological purposes, purification of parasite cysts is required. Different methods were designed for this reason. A method, which can save the safe cysts without debris and other contamination, is required. In this study we decided to purify cysts from positive specimens with known methods and compare them on the basis of purification grade. Material and methods: three different methods were used for purification of cysts from positive samples (sucrose one stage, sucrose- percoll, and sucrose two stage gradients). The resulting product of these methods compared on the basis of elimination of debris, cysts purification grade and recovered cyst by using direct examination and Neobar chamber counting. Results: Cyst solutions from first and second methods were contained debris and cellulose. In third method approximately all of bacteria were eliminated and cysts obtained safely but cysts recovery rate was low (3×104 per 2gr of stool). Conclusion: third method (sucrose two stage gradients) was better than two other for isolation and purification of parasitic cysts and debris was less it seems designing a new simple method is highly needed for better elimination the debris and higher recovery rate of cysts. ژیاردیا، کیست، خالص سازی Giardia lamblia, Cyst Purification, Sucrose- percoll 71 76 http://yafte.lums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-322&slc_lang=en&sid=1 afshin Barazesh افشین برازش afshinbarazesh@yahoo.com 720031947532846005914 720031947532846005914 Yes jafar Madjidi جعفر مجیدی 720031947532846005915 720031947532846005915 No esmaeel Fallah اسماعیل فلاح 720031947532846005916 720031947532846005916 No rasoul Jamali رسول جمالی 720031947532846005917 720031947532846005917 No ardavan Ghazanchaei اردوان قازانچائی 720031947532846005918 720031947532846005918 No