fa جداسازی باکتریهای بومی تولید کننده آنزیم کلسترول اکسیداز از خاک، آب ، پساب کارخانه های چرم و پوست ، صابون سازی و فراورده های لبنی پژوهشي اصیل Original Research بحث و نتیجه‌گیری: در این مطالعه، باکتریهای بومی مولد کلسترول اکسیداز جدا گردید. این دو باکتری بواسطه خصوصیات مورفولوژیکی، بیوشیمیایی و روشهای تائید مولکولی جزء گونه Rhodococcus طبقه بندی گردید. مواد و روش‌ها: تعداد 187 نمونه از پساب کارخانه چرم وپوست و صابون سازی ، خاک ، لبنیات و آب های راکد جمع آوری گردید. پس از کشت نمونه ها، باکتریهای رشد یافته با تست های میکروبی و بیوشیمیایی تعیین هویت گردید. برای تایید فعالیت کلنی های مولد آنزیم کلسترول اکسیداز، روشهای رنگ سنجی و قهوه ای نمودن محیط کشت استفاده شد. از تکنیک 16s rRNA PCR برای تایید قطعی سویه های بدست آمده استفاده شد. یافته‌ها: از 187 نمونه ،تنها 2 باکتری از خاک جداسازی گردید و نتایج نشان داد که متعلق به گونه رودوکوکوس می باشند . همچنین در آزمایش قهوه ای نمودن و رنگ سنجی، فعالیت کلسترول اکسیدازی هر دو باکتری تایید شد. هویت مولکولی سویه های مزبور با تعیین توالی ژن 16s rRNA تایید شد. مقدمه: کلسترول اکسیداز آنزیمی است که اکسیداسیون کلسترول را همراه با احیای اکسیژن مولکولی به پراکسیدهیدروژن انجام می دهد . این آنزیم توسط برخی میکروارگانیسم های بیماریزا و غیر بیماریزا تولید می شود و ازمهمترین آنزیم های تجاری دنیاست که کاربردهای وسیعی در صنایع مختلف پیدا کرده است. هدف از این مطالعه جداسازی باکتریهای بومی مولد کلسترول اکسیداز و تعیین هویت آنها با استفاده از روشهای میکروبی، بیوشیمیایی و ژنتیکی می باشد. Background : Cholesterol oxidase (CHO) is an enzyme that catalyzes cholesterol oxidation and produces hydrogen peroxide (H2O2). This enzyme is produced by certain pathogenic and non-pathogenic microorganisms and is a commercially important enzyme in the world which has found wide application in various industries. The aim of the study was to isolate native bacteria producing CHO and their identification using microbial, biochemical and molecular methods. Materials and Methods: A total of 187 samples were collected from wastewater of leather and soap factories, soil, dairy products, and stagnant water. After the samples were cultured, the bacteria were identified using the microbial and biochemical tests. Then, the methods of colorimetric and browning of culture medium were applied to select the colonies producing CHO.PCR 16s rRNA technique was used for final confirmation of obtained strains. Results: Of the 187 collected samples, two microbial samples were isolated, both of which from the soil samples. The results of the biochemical tests showed that the two bacteria were Rhodococcus. Both methods of colorimetric and browning of culture medium confirmed the activity of CHO. Molecular identification of these strains were also confirmed by sequencing 16s rRNA gene. Conclusion: In this study, native bacteria producing CHO were isolated. These two bacteria were classified as Rhodococcus using morphological, biochemical and molecular methods. کلسترول اکسیداز، رودوکوکوس ، جداسازی. Cholesterol oxidase, Rhodococcus, Isolation. 33 41 http://yafte.lums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-409&slc_lang=fa&sid=1 hamed esmaeel Lashgarian حامد اسمعیل لشکریان hamedesmaiili@gmail.com 720031947532846006809 720031947532846006809 Yes Department of Biochemistry and Genetics گروه بیوشیمی و ژنتیک، دانشکده پزشکی kiana Shahzamani کیانا شاه زمانی 720031947532846006810 720031947532846006810 No Department of Biology, Faculty of Sciences, , Lorestan University, Khorramabad, Iran گروه زیست شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه لرستان، خرم آباد، ایران. jamshid Raheb جمشید راهب 720031947532846006811 720031947532846006811 No National Institute for Genetic Engineering and Biotechnology (NIGEB), Tehran, Iran گروه باکتوویروس، پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری، تهران، ایران.