fa طراحی و ساخت سازه‌ ژنی نوترکیب بیان کننده ژن حفاظت کننده سلولی پژوهشي اصیل Original Research <p>بحث و نتیجه‌گیری: ساخت سازه نوترکیبMT1-pccDNA3.1 و ورود موفق آن به درون سلول‌های بنیادی مزانشیمی می‌تواند به عنوان یکی از راهبُردهای محافظت سلول‌های پیوندی از مرگ سلولی پیشنهاد گردد و ممکن است بتواند راه کاری جدید در راستای ارتقاء کارآمدی سلول درمانی بعد از پیوند را فراهم آورد. مواد و روش‌ها: سلول‌های بنیادی مزانشیمی از مغز استخوان انسان جداسازی و توسط روش فلوسایتومتری تأیید شدند. توالی کامل cDNA ژن MT1 جداسازی شد و برای وارد شدن در وکتور پلاسمیدی pcDNA 3.1 مورد استفاده قرار گرفت. سازه ژنی نوترکیب ایجاد شده، به روش لیپوفکشن وارد MSCs گردید. بیان MT1 توسط RT-PCR و لکه‌گذاری وسترن پایش شد. یافته‌ها: ژن MT1 انسانی نوترکیب با موفقیت در وکتور pcDNA کلون گردید و درست قرار گرفتن ژن در قالب صحیح درون وکتور به وسیله تعیین توالی DNA تأیید شد. افزایش بیان MT1 در MSCs به وسیله روش های RT-PCR و لکه‌گذاری وسترن مورد تأیید قرار گرفت. این نتایج نشان دهنده بیان موقت MT1 در MSCs بود. مقدمه: دست‌ورزی ژنتیکی یک راهبرد مؤثر برای حفاظت سلول‌ها در برابر آسیب‌های محیطی و بالا بردن توانمندی آنان در استفاده‌های درمانی است. به منظور جلوگیری از عوارض ناخواسته‌ای همچون ایجاد بدخیمی‌ها، دست‌کاری ژنتیکی و افزایش بیان ژن‌های حاصل از آن می‌بایست به صورت موقت باشد. هدف از انجام این پژوهش، کلونینگ و افزایش بیان ژن محافظ سلولی &quot;متالوتیونین یک&quot; (MT1) انسانی به صورت موقت در سلول‌های بنیادی مزانشیمی (MSCs) با استفاده از سیستم بیانی پلاسمیدی و استفاده از وکتور pcDNA 3.1 بود. این افزایش بیان به منظور افزایش مقاومت سلول‌های مزانشیمی نسبت به آسیب های محیطی و ... است.</p> <p>Background : Genetic manipulation is an effective strategy to protect cells against environmental damages and enhance their capabilities for therapeutic usage. In order to avoid unwanted side effects, such as cancers, the expression of genes should be temporary increased. The aim of this study was to clone and temporary increased expression of a cell protective gene, Metallothionein 1 (MT1) in mesenchymal stem cells (MSCs) using plasmid expression system with the pcDNA 3.1 vector. Materials and Methods: Human bone marrow mesenchymal stem cells were isolated and validated by flow cytometry method. Complete cDNA sequence of MT1 gene was isolated and cloned in a plasmid vector named pcDNA 3.1. Recombinant gene construct was generated and transferred to the human MSCs. MT1 expression was monitored by RT-PCR and western blotting. Results: Recombinant human MT1 gene was successfully cloned in pcDNA vector and the correct format gene in the vector was confirmed by DNA sequencing. By RT-PCR and western blot methods, increased MT1 expression in MSCs was approved. The results showed that the expression of MT1 in the MSCs was transient. Conclusion: Genetic manipulation of MSCs by MT1using pcDNA 3.1 plasmid vector may be one of the protective strategies for transplanted cells from apoptosis and promote a new approach to provide an effective cell therapy after transplantation.</p> سلول‌های بنیادی مزانشیمی, Mesenchymal stem cells, Metallothionein 1, pcDNA 3.1. 40 51 http://yafte.lums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-457&slc_lang=fa&sid=1 aliasghar Kiani علی‌اصغر کیانی aliasgharkianii@gmail.com 7200319475328460013584 7200319475328460013584 Yes raheleh Halabian راحله حلبیان 7200319475328460013585 7200319475328460013585 No mahriar Habibi Roudkenar مهریار حبیبی‌رودکنار 7200319475328460013586 7200319475328460013586 No mahshid Mohammadipour مهشید محمدی‌پور 7200319475328460013587 7200319475328460013587 No ali Sheikhian علی شیخیان 7200319475328460013588 7200319475328460013588 No masoume Kashi معصومه کاشی 7200319475328460013589 7200319475328460013589 No