fa ارزیابی حساسیت سه پرایمر مختلف با استفاده از روش RFLP -PCR برای تمایز مولکولی مایکوباکتریوم‌های آتیپیک پژوهشي اصیل Original Research با افزایش عفونت های ناشی از مایکوباکتریوم های آتیپیک (Non- tuberculosis mycobacterium NTM) در سال های اخیر، تشخیص سریع این دسته از اهمیت ویژه ای برخوردار است. از آنجایی که روش‌های فنوتیپی وقت‌گیر و پرهزینه هستند، امروزه از روش های مولکولی به طور وسیعی برای شناسایی و تمایز گونه های مختلف مایکوباکتریوم ها استفاده می‌شود. هدف ازاین مطالعه، تمایز مولکولی مایکوباکتریوم های آتیپیک با استفاده از سه پرایمر TB و 16S-23S rRNA gene spacer و hsp65 در روش RFLP -PCR و ارزیابی حساسیت این پرایمرها است. مواد و روش‌ها: بررسی روی 48 نمونه مایکوباکتریوم آتیپیک جدا شده از بیماران مبتلا به سل ریوی که توسط تست‌های فنوتیپی شناسایی شده بودند، صورت گرفت. حساسیت دارویی با روش نسبی (Proportional method) انجام و قطعاتی از ژنهای hsp65 ،16S-23S rRNA gene spacer توسط PCR تکثیریافت. سپس قطعات تکثیر یافته توسط آنزیم‌های AVaII، HpaII، HphI, HaeIII، BsteII هضم و الگوی بدست آمده روی آگارز 2% بررسی شد. بحث و نتیجه‌گیری: روش hsp65 PCR- RFLP از حساسیت و دقت بالایی برای تمایز گونه های مختلف مایکوباکتریوم‌های غیر‌توبرکلوزیس برخوردار است. یافته‌ها: از مجموع 48 نمونه، 8 نمونه (6/16%) MDR (مقاوم به چند دارو)، 4 نمونه ( 3/8%) حساس و 36 نمونه (75%) غیرMDR (مقاوم به یک دارو) بود. 13 نمونه (27%) تند رشد و سایر نمونه ها ( 73%) کند رشد بود. سرعت تشخیص پرایمر hsp65 در روش PCR- RFLP، در بسیاری از گونه ها بالاتر از بقیه پرایمر ها گزارش شد. i Rapiddentification of atypical mycobacterium(Non-tuberculosis mycobacterium NTM) is important because of increase of these organisms infection in recent years. As phenotypic tests are time consuming and expensive, nowadays the molecular methods are widely used for rapid identification of mycobacterium spcies. The aim of this study was molecular differentiation of atypical mycobacteria using three primers in the PCR- RFLP method and evaluation of sensitivity of primers. Materials and Methods: This study was performed on 48 atypical mycobacterium specimens separated from pulmonary tuberculosis (PTB) patients who were indentified by phenotypic tests. Drug susceptibility testing was performed by proportional method, the fragments of the 16S-23S rRNA gene spacer and hsp65 gene were amplified by PCR method. Subsequently the amplicons were digested with enzymes namely AvaII,HphI, HpaII, BstEII and HaeIII and electrophoresed on 2% agarose gel. Results: A total of 48 isolates, 8 (16.6%) had multi-drug resistant (MDR-TB), 4 (8.3%) had susceptible and 36 (75%) had non MDR ( combined resistance). 13 (27%) were rapid growing and 73% were slow growing . By rate detection of hsp65 PCR-RFLP primer was higher than other primers. Conclusion: hsp65 PCR- RFLP method was more specific and exact for differentiation of non tuberculosis mycobacterium(NTM). مایکوباکتریوم های آتیپیک، تمایز مولکولی، روش PCR- RFLP Atypical mycobacterium, Molecular differentiation, PCR-RFLP method. 83 91 http://yafte.lums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-145-207&slc_lang=fa&sid=1 feze Heidari فضه حیدری fzheidari@yahoo.com 720031947532846002111 720031947532846002111 Yes Islamic Azad University, Tehran North Branch, Tehran, Iran دانشگاه آزاد اسلامی تهران parisa Farnia پریسا فرنیا 720031947532846002112 720031947532846002112 No Mycobacteriology Research Center, Shahid Beheshti University of Medical Sciences, Tehran, Iran. مرکزتحقیقات مایکوباکتریولوژی، دانشگاه علوم پزشکی شهید بهشتی، jamile norozi جمیله نوروزی 720031947532846002113 720031947532846002113 No Department of Microbiology, Islamic Azad University, Tehran North Branch, Tehran, Iran دانشگاه آزاد اسلامی تهران ahmad majd احمد مجد 720031947532846002114 720031947532846002114 No Department of Biology, Islamic Azad University, Tehran North Branch, Tehran, Iran دانشگاه آزاد اسلامی تهران