fa خالص سازی و بررسی خواص سینتیکی آنزیم هیستامیناز از گونه خلر ( Lathyrus sativus ) با استفاده از کروماتوگرافی تعویض آنیون پژوهشي اصیل Original Research مقدمه: مسمومیت با هیستامین به طور مستقیم در ارتباط با نگهداری نامناسب غذاها می‌باشد. دی آمین اکسیداز، دآمیناسیون اکسیداتیو هیستامین و آمین‌های بیوژنیک دیگر مانند کاداورین و پوترسین را کاتالیز می‌کند. دی‌آمین اکسیدازهای گیاهی پراکندگی زیادی در خانواده لگومینه مانند نخود، خلر و ماش دارند. به این دلیل، این مطالعه انجام گرفت تا خالص‌سازی و خواص کینتیکی آنزیم هیستامیناز از جوانه‌های خلر آزمایش گردد. بحث و نتیجه‌گیری: در مجموع آنزیم هیستامیناز گیاهی به عنوان یک آنزیم جدید در پیشگیری از مسمومیت با هیستامین امیدوار کننده است یافته‌ها: فعالیت ویژه آنزیم نهایی خالص شده برای سوبسترای هیستامین 50 واحد در میلی‌گرم پروتئین یادداشت شد و خواص کینتیکی آنزیم (05/3=Vmax ، 5/2=Km) و هموژنوسیتی آنزیم خالص شده بوسیله SDS-PAGE در ناحیه 72 کیلو دالتون نشان داده شد. مواد و روش‌ها: خالص‌سازی آنزیم بوسیله روش انجام شده فدریکو و همکاران با یکسری تغییرات بود. به طور کوتاه، با استفاده از رسوب دادن بوسیله سولفات آمونیوم، دیالیز علیه بافر پتاسیم 50 میلی مولار 7pH= به مدت 18 ساعت، تغلیظ بوسیله کیسه‌های دیالیز بر روی پلی اتیلن گلیکول، گذاشتن روی ستون DEAE-52 سفادکس که قبلاً با بافر فسفات پتاسیم 15 میلی مولار و 5/5pH= به تعادل رسیده بود حاوی یک میکرومول CuCl2 و در نهایت آنزیم با افزایش شیب نمک در M 2/0 خارج گردید. هموژنوسیته آنزیم بوسیله تکنیک SDS-PAGE در هر مرحله تائید شد و فعالیت دی‌آمین اکسیداز بوسیله اسپکتروفتومتر مشخص گردید. Background : The histamine poisoning directly correlates to improper preservation of foods. Diamine oxidase catalyses the oxidative deamination of histamine and other biogenic amines such as cadaverine and putrescine. Plant diamine oxidases are of widespread occurrence in Leguminaceae such as Cicer arietinum, Lathyrus sativus and Vigna radiata. For this reason, this study was carried out to examine purification and enzyme kinetic properties of histaminase from the Lathyrus sativus seedling. Materials and Methods: The purification of histaminase was according to the method given by Federico et al., with some modifications. In short, using ammonium sulfate precipitation of proteins, dialysis against potassium phosphate buffer 50mM, pH=7 over night, concentrating via dialysis bag and PEG, loading on DEAE52-sephadex column previously equilibrated with 15 mM potassium phosphate buffer pH=5.5 containing 1 µmol CuCl2 and finally enzyme eluted by increasing the NaCl concentration to 0.2 M. The homogenicity of enzyme was confirmed by SDS-PAGE in each step and diamine oxidase activity was determined by a spectrophotometer. Results: The specific activity of the final purified enzyme was recorded at 50 U/mg protein for histamine substrate and enzyme kinetic properties of this enzyme (Km=2.5 mM, Vmax=3.05), and the homogenicity of purified enzyme by SDS-PAGE at 72 kDa region were indicated. Conclusion: Overall, the herbal histaminase as a new enzyme in prevention of histamine poisoning is promising. هیستامیناز، کینتیک آنزیمی، Lathyrus sativus Histaminase, Enzyme kinetic, Lathyrus sativus 31 42 http://yafte.lums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-53&slc_lang=fa&sid=1 masoud Alirezaei مسعود علیرضایی alirezaei_m54@yahoo.com 720031947532846006472 720031947532846006472 Yes Faculty of Veterinary Medicine, Lorestan University, Khorramabad, Iran azadeh Khonsari آزاده خونساری 720031947532846006473 720031947532846006473 No Razi Herbal Medicines Research Center, Lorestan University of Medical Sciences, Khorramabad, Iran مرکز تحقیقات داروهای گیاهی رازی، دانشگاه علوم پزشکی لرستان، خرم آباد، ایران shima Neamati شیما نعمتی 720031947532846006474 720031947532846006474 No Razi Herbal Medicines Research Center, Lorestan University of Medical Sciences, Khorramabad, Iran مرکز تحقیقات داروهای گیاهی رازی، دانشگاه علوم پزشکی لرستان، خرم آباد، ایران najmeh Khalighyan نجمه خلیقیان 720031947532846006475 720031947532846006475 No Medicinal and Natural Products and Chemistry Research Center, Shiraz University of Medical Sciences, Shiraz, Iran مرکزتحقیقات شیمی و فراورده های دارویی دانشگاه علوم پزشکی شیراز، شیراز، ایران katayon Javidnia کتایون جاوید نیا 720031947532846006476 720031947532846006476 No Medicinal and Natural Products and Chemistry Research Center, Shiraz University of Medical Sciences, Shiraz, Iran مرکزتحقیقات شیمی و فراورده های دارویی دانشگاه علوم پزشکی شیراز، شیراز، ایران